Grazas por visitar nature.com. A versión do navegador que estás a usar ten compatibilidade limitada con CSS. Para obter a mellor experiencia, recomendámosche que uses a versión máis recente do navegador (ou que desactives o modo de compatibilidade en Internet Explorer). Ademais, para garantir a compatibilidade continua, este sitio non incluirá estilos nin JavaScript.
A melamina é un contaminante alimentario recoñecido que pode estar presente en certas categorías de alimentos tanto accidental como intencionadamente. O obxectivo deste estudo foi verificar a detección e cuantificación da melamina en fórmulas infantís e leite en po. Analizáronse un total de 40 mostras de alimentos dispoñibles comercialmente, incluíndo fórmulas infantís e leite en po, de diferentes rexións de Irán. O contido aproximado de melamina das mostras determinouse mediante un sistema de cromatografía líquida de alta resolución-ultravioleta (HPLC-UV). Construíuse unha curva de calibración (R2 = 0,9925) para a detección de melamina no rango de 0,1–1,2 μg mL−1. Os límites de cuantificación e detección foron de 1 μg mL−1 e 3 μg mL−1, respectivamente. A melamina analizouse en fórmulas infantís e leite en po e os resultados mostraron que os niveis de melamina nas mostras de fórmulas infantís e leite en po foron de 0,001–0,095 mg kg−1 e de 0,001–0,004 mg kg−1, respectivamente. Estes valores están en consonancia coa lexislación da UE e co Codex Alimentarius. É importante ter en conta que o consumo destes produtos lácteos con contido reducido de melamina non supón un risco significativo para a saúde do consumidor. Isto tamén se ve corroborado polos resultados da avaliación de riscos.
A melamina é un composto orgánico coa fórmula molecular C3H6N6, derivado da cianamida. Ten unha solubilidade moi baixa en auga e contén aproximadamente un 66 % de nitróxeno. A melamina é un composto industrial amplamente utilizado cunha ampla gama de usos lexítimos na produción de plásticos, fertilizantes e equipos de procesamento de alimentos (incluídos os envases de alimentos e os utensilios de cociña)1,2. A melamina tamén se utiliza como vehículo de fármacos para o tratamento de enfermidades. A alta proporción de nitróxeno na melamina pode levar ao mal uso do composto e á transmisión das propiedades das moléculas de proteínas aos ingredientes alimentarios3,4. Polo tanto, engadir melamina aos produtos alimenticios, incluídos os produtos lácteos, aumenta o contido de nitróxeno. Así, concluíuse erroneamente que o contido de proteínas do leite era maior do que realmente era.
Por cada gramo de melamina engadido, o contido proteico dos alimentos aumentará nun 0,4 %. Non obstante, a melamina é moi soluble en auga e pode causar danos máis graves. Engadir 1,3 gramos de melamina a produtos líquidos como o leite pode aumentar o contido proteico do leite nun 30 %5,6. Aínda que a melamina se engade aos alimentos animais e mesmo humanos para aumentar o contido proteico7, a Comisión do Codex Alimentarius (CAC) e as autoridades nacionais non aprobaron a melamina como aditivo alimentario e clasificárona como perigosa se se inxire, inhala ou absorbe a través da pel. En 2012, a Axencia Internacional para a Investigación do Cancro da Organización Mundial da Saúde (OMS) clasificou a melamina como carcinóxeno de clase 2B porque pode ser prexudicial para a saúde humana8. A exposición a longo prazo á melamina pode causar cancro ou danos renais2. A melamina nos alimentos pode formar complexos co ácido cianúrico para formar cristais amarelos insolubles en auga que poden causar danos no tecido renal e da vexiga, así como cancro do tracto urinario e perda de peso9,10. Pode causar intoxicación alimentaria aguda e, en concentracións elevadas, a morte, especialmente en bebés e nenos pequenos.11 A Organización Mundial da Saúde (OMS) tamén fixou a inxesta diaria tolerable (IDT) de melamina para humanos en 0,2 mg/kg de peso corporal ao día, baseándose nas directrices da CAC.12 A Administración de Alimentos e Medicamentos dos Estados Unidos (FDA) fixou o nivel máximo de residuos de melamina en 1 mg/kg en fórmulas infantís e 2,5 mg/kg noutros alimentos.2,7 En setembro de 2008, informouse de que varios fabricantes nacionais de fórmulas infantís engadiran melamina ao leite en po para aumentar o contido proteico dos seus produtos, o que provocou unha intoxicación por leite en po e desencadeou un incidente de intoxicación por melamina en todo o país que enfermou a máis de 294 000 nenos e hospitalizou a máis de 50 000.13
A lactación materna non sempre é posible debido a diversos factores, como as dificultades da vida urbana ou as enfermidades da nai ou do fillo, o que leva ao uso de fórmulas infantís para alimentar os bebés. Como resultado, creáronse fábricas para producir fórmulas infantís que teñan unha composición o máis semellante posible ao leite materno14. As fórmulas infantís que se venden no mercado adoitan estar feitas de leite de vaca e adoitan estar feitas cunha mestura especial de graxas, proteínas, carbohidratos, vitaminas, minerais e outros compostos. Para que sexan semellantes ao leite materno, o contido de proteínas e graxas da fórmula varía e, dependendo do tipo de leite, están fortificadas con compostos como vitaminas e minerais como o ferro15. Dado que os bebés son un grupo sensible e existe risco de intoxicación, a seguridade do consumo de leite en po é de vital importancia para a saúde. Despois do caso de intoxicación por melamina entre bebés chineses, os países de todo o mundo prestaron moita atención a este problema e a sensibilidade desta área tamén aumentou. Polo tanto, é especialmente importante reforzar o control da produción de fórmulas infantís para protexer a saúde dos bebés. Existen varios métodos para detectar a melamina nos alimentos, incluíndo a cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), a electroforese, o método sensorial, a espectrofotometría e o ensaio inmunosorbente ligado a encimas antíxeno-anticorpo16. En 2007, a Administración de Alimentos e Medicamentos dos Estados Unidos (FDA) desenvolveu e publicou un método HPLC para a determinación de melamina e ácido cianúrico nos alimentos, que é o método máis eficaz para determinar o contido de melamina17.
As concentracións de melamina nas fórmulas infantís medidas mediante unha nova técnica de espectroscopia infravermella oscilaron entre 0,33 e 0,96 miligramos por quilogramo (mg kg-1). 18 Un estudo realizado en Sri Lanka atopou que os niveis de melamina no leite enteiro en po oscilaban entre 0,39 e 0,84 mg kg-1. Ademais, as mostras de fórmulas infantís importadas contiñan os niveis máis altos de melamina, con 0,96 e 0,94 mg/kg, respectivamente. Estes niveis están por debaixo do límite regulamentario (1 mg/kg), pero é necesario un programa de vixilancia para a seguridade do consumidor. 19
Varios estudos examinaron os niveis de melamina nas fórmulas infantís iranianas. Arredor do 65 % das mostras contiñan melamina, cunha media de 0,73 mg/kg e un máximo de 3,63 mg/kg. Outro estudo informou de que o nivel de melamina nas fórmulas infantís oscilaba entre os 0,35 e os 3,40 μg/kg, cunha media de 1,38 μg/kg. En xeral, a presenza e o nivel de melamina nas fórmulas infantís iranianas avaliáronse en varios estudos, e algunhas mostras que contiñan melamina superaban o límite máximo establecido polas autoridades reguladoras (2,5 mg/kg/alimento).
Tendo en conta o enorme consumo directo e indirecto de leite en po na industria alimentaria e a especial importancia das fórmulas infantís na alimentación infantil, este estudo tivo como obxectivo validar o método de detección de melamina no leite en po e nas fórmulas infantís. De feito, o primeiro obxectivo deste estudo foi desenvolver un método cuantitativo rápido, sinxelo e preciso para detectar a adulteración de melamina nas fórmulas infantís e no leite en po mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) e detección ultravioleta (UV); en segundo lugar, o obxectivo deste estudo foi determinar o contido de melamina nas fórmulas infantís e no leite en po que se venden no mercado iraniano.
Os instrumentos empregados para a análise de melamina varían segundo o lugar de produción de alimentos. Empregouse un método de análise HPLC-UV sensible e fiable para medir os residuos de melamina no leite e nas fórmulas infantís. Os produtos lácteos conteñen diversas proteínas e graxas que poden interferir coa medición da melamina. Polo tanto, como sinalaron Sun et al. 22, é necesaria unha estratexia de limpeza axeitada e eficaz antes da análise instrumental. Neste estudo, empregamos filtros de xiringa desbotables. Neste estudo, empregamos unha columna C18 para separar a melamina nas fórmulas infantís e no leite en po. A figura 1 mostra o cromatograma para a detección de melamina. Ademais, a recuperación das mostras que contiñan entre 0,1 e 1,2 mg/kg de melamina oscilou entre o 95 % e o 109 %, a ecuación de regresión foi y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925) e os valores da desviación estándar relativa (RSD) oscilaron entre o 0,8 e o 2 %. Os datos dispoñibles indican que o método é fiable no rango de concentración estudado (Táboa 1). O límite instrumental de detección (LOD) e o límite de cuantificación (LOQ) da melamina foron de 1 μg mL−1 e 3 μg mL−1, respectivamente. Ademais, o espectro UV da melamina mostrou unha banda de absorción a 242 nm. O método de detección é sensible, fiable e preciso. Este método pódese empregar para a determinación rutineira do nivel de melamina.
Varios autores publicaron resultados semellantes. Desenvolveuse un método de cromatografía líquida de alta resolución con matriz de fotodíodos (HPLC) para a análise de melamina en produtos lácteos. Os límites inferiores de cuantificación foron de 340 μg kg−1 para o leite en po e 280 μg kg−1 para a fórmula infantil a 240 nm. Filazzi et al. (2012) informaron de que non se detectou melamina na fórmula infantil mediante HPLC. Non obstante, o 8 % das mostras de leite en po contiñan melamina a un nivel de 0,505–0,86 mg/kg. Tittlemiet et al.23 realizaron un estudo similar e determinaron que o contido de melamina na fórmula infantil (número de mostra: 72) mediante cromatografía líquida de alta resolución con espectrometría de masas/MS (HPLC-MS/MS) era de aproximadamente 0,0431–0,346 mg kg−1. Nun estudo realizado por Venkatasamy et al. (2010), empregáronse métodos de química verde (sen acetonitrilo) e cromatografía líquida de alta resolución en fase inversa (RP-HPLC) para estimar a melamina en fórmulas infantís e leite. O rango de concentración da mostra foi de 1,0 a 80 g/mL e a resposta foi lineal (r > 0,999). O método mostrou recuperacións de 97,2–101,2 no rango de concentración de 5–40 g/mL e a reproducibilidade foi inferior ao 1,0 % de desviación estándar relativa. Ademais, o LOD e o LOQ observados foron de 0,1 g mL−1 e 0,2 g mL−124, respectivamente. Lutter et al. (2011) determinaron a contaminación por melamina en leite de vaca e fórmulas infantís a base de leite mediante HPLC-UV. As concentracións de melamina variaron de < 0,2 a 2,52 mg kg−1. O rango dinámico lineal do método HPLC-UV foi de 0,05 a 2,5 mg kg−1 para o leite de vaca, de 0,13 a 6,25 mg kg−1 para as fórmulas infantís cunha fracción másica de proteínas <15 % e de 0,25 a 12,5 mg kg−1 para as fórmulas infantís cunha fracción másica de proteínas do 15 %. Os resultados do LOD (e do LOQ) foron de 0,03 mg kg−1 (0,09 mg kg−1) para o leite de vaca, 0,06 mg kg−1 (0,18 mg kg−1) para as fórmulas infantís con <15 % de proteínas e 0,12 mg kg−1 (0,36 mg kg−1) para as fórmulas infantís con 15 % de proteínas, cunha relación sinal-ruído de 3 e 1025 para o LOD e o LOQ, respectivamente. Diebes et al. (2012) investigaron os niveis de melamina en mostras de fórmulas infantís e leite en po mediante HPLC/DMD. Nas fórmulas infantís, os niveis máis baixos e máis altos foron de 9,49 mg kg−1 e 258 mg kg−1, respectivamente. O límite de detección (LOD) foi de 0,05 mg kg−1.
Javaid et al. informaron de que os residuos de melamina nas fórmulas infantís estaban no rango de 0,002–2 mg kg−1 mediante espectroscopia de infravermellos por transformada de Fourier (FT-MIR) (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3,5 mg kg−1). Rezai et al.27 propuxeron un método HPLC-DDA (λ = 220 nm) para estimar a melamina e acadaron un LOQ de 0,08 μg mL−1 para o leite en po, que foi inferior ao nivel obtido neste estudo. Sun et al. desenvolveron unha RP-HPLC-DAD para a detección de melamina en leite líquido mediante extracción en fase sólida (SPE). Obtiveron un LOD e un LOQ de 18 e 60 μg kg−128, respectivamente, que é máis sensible que o estudo actual. Montesano et al. confirmou a eficacia do método HPLC-DMD para a avaliación do contido de melamina en suplementos proteicos cun límite de cuantificación de 0,05–3 mg/kg, que foi menos sensible que o método empregado neste estudo29.
Sen dúbida, os laboratorios analíticos desempeñan un papel importante na protección do medio ambiente mediante a monitorización de contaminantes en diversas mostras. Non obstante, o uso dun gran número de reactivos e solventes durante a análise pode resultar na formación de residuos perigosos. Polo tanto, a química analítica verde (GAC) desenvolveuse no ano 2000 para reducir ou eliminar os efectos adversos dos procedementos analíticos nos operadores e no medio ambiente26. Os métodos tradicionais de detección de melamina, incluíndo a cromatografía, a electroforese, a electroforese capilar e o ensaio inmunosorbente ligado a encimas (ELISA), utilizáronse para identificar a melamina. Non obstante, entre os numerosos métodos de detección, os sensores electroquímicos chamaron moita atención debido á súa excelente sensibilidade, selectividade, tempo de análise rápido e características fáciles de usar30,31. A nanotecnoloxía verde utiliza vías biolóxicas para sintetizar nanomateriais, o que pode reducir a xeración de residuos perigosos e o consumo de enerxía, promovendo así a implementación de prácticas sostibles. Os nanocompostos, por exemplo, feitos con materiais respectuosos co medio ambiente, pódense usar en biosensores para detectar substancias como a melamina32,33,34.
O estudo demostra que a microextracción en fase sólida (SPME) se emprega de xeito eficaz debido á súa maior eficiencia enerxética e sustentabilidade en comparación cos métodos de extracción tradicionais. O respecto polo medio ambiente e a eficiencia enerxética da SPME convértena nunha excelente alternativa aos métodos de extracción tradicionais en química analítica e proporcionan un método máis sostible e eficiente para a preparación de mostras35.
En 2013, Wu et al. desenvolveron un biosensor de resonancia de plasmón superficial (mini-SPR) altamente sensible e selectivo que utiliza o acoplamento entre anticorpos de melamina e antimelamina para detectar rapidamente a melamina en fórmulas infantís mediante un inmunoensaio. O biosensor SPR combinado cun inmunoensaio (que usa albumina sérica bovina conxugada con melamina) é unha tecnoloxía fácil de usar e de baixo custo cun límite de detección de só 0,02 μg mL-136.
Nasiri e Abbasian empregaron un sensor portátil de alto potencial en combinación con compostos de óxido de grafeno-quitosano (GOCS) para detectar melamina en mostras comerciais37. Este método mostrou unha selectividade, precisión e resposta ultra altas. O sensor GOCS demostrou unha sensibilidade notable (239,1 μM−1), un rango lineal de 0,01 a 200 μM, unha constante de afinidade de 1,73 × 104 e un LOD de ata 10 nM. Ademais, un estudo realizado por Chandrasekhar et al. en 2024 adoptou unha abordaxe ecolóxica e rendible. Empregaron extracto de casca de papaia como axente redutor para sintetizar nanopartículas de óxido de zinc (ZnO-NP) nun método ecolóxico. Posteriormente, desenvolveuse unha técnica única de espectroscopia micro-Raman para a determinación da melamina en fórmulas infantís. As ZnO-NP derivadas de residuos agrícolas demostraron potencial como unha valiosa ferramenta de diagnóstico e unha tecnoloxía fiable e de baixo custo para monitorizar e detectar melamina38.
Alizadeh et al. (2024) empregaron unha plataforma de fluorescencia de estrutura metalorgánica (MOF) altamente sensible para determinar a melamina no leite en po. O rango lineal e o límite inferior de detección do sensor, determinados usando 3σ/S, foron de 40 a 396,45 nM (equivalente a 25 μg kg−1 a 0,25 mg kg−1) e 40 nM (equivalente a 25 μg kg−1), respectivamente. Este rango está moi por debaixo dos niveis máximos de residuos (LMR) establecidos para a identificación de melamina en fórmulas infantís (1 mg kg−1) e outras mostras de alimentos/pensos (2,5 mg kg−1). O sensor fluorescente (terbio (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) demostrou unha maior precisión e unha capacidade de medición máis precisa que a HPLC39 na detección de melamina no leite en po. Os biosensores e nanocompostos en química verde non só melloran as capacidades de detección, senón que tamén minimizan os riscos ambientais en liña cos principios do desenvolvemento sostible.
Os principios da química verde aplicáronse a varios métodos para a determinación da melamina. Unha das estratexias é o desenvolvemento dun método de microextracción en fase sólida dispersiva verde empregando o polímero polar natural β-ciclodextrina reticulada con ácido cítrico para a extracción eficiente da melamina 40 de mostras como leite de fórmula infantil e auga quente. Outro método emprega a reacción de Mannich para a determinación da melamina en mostras de leite. Este método é económico, respectuoso co medio ambiente e moi preciso, cun rango lineal de 0,1 a 2,5 ppm e un límite de detección baixo 41. Ademais, desenvolveuse un método rendible e respectuoso co medio ambiente para a determinación cuantitativa da melamina en leite líquido e leite de fórmula infantil empregando espectroscopia de transmisión infravermella por transformada de Fourier con alta precisión e límites de detección de 1 ppm e 3,5 ppm, respectivamente 42. Estes métodos demostran a aplicación dos principios da química verde ao desenvolvemento de métodos eficientes e sostibles para a determinación da melamina.
Varios estudos propuxeron métodos innovadores para a detección de melamina, como o uso da extracción en fase sólida e a cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)43, así como a cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) rápida, que non require un pretratamento complexo nin reactivos de pares de ións, o que reduce a cantidade de residuos químicos44. Estes métodos non só proporcionan resultados precisos para a determinación de melamina en produtos lácteos, senón que tamén cumpren cos principios da química verde, minimizando o uso de produtos químicos perigosos e reducindo o impacto ambiental global do proceso analítico.
Analizáronse corenta mostras de diferentes marcas por triplicado, e os resultados preséntanse na Táboa 2. Os niveis de melamina nas mostras de fórmula infantil e leite en po variaron de 0,001 a 0,004 mg/kg e de 0,001 a 0,095 mg/kg, respectivamente. Non se observaron cambios significativos entre os tres grupos de idade das fórmulas infantís. Ademais, detectouse melamina no 80 % do leite en po, pero o 65 % das fórmulas infantís estaban contaminadas con melamina.
O contido de melamina no leite en po industrial foi maior que na fórmula infantil, e a diferenza foi significativa (p < 0,05) (Figura 2).
Os resultados obtidos estiveron por debaixo dos límites establecidos pola FDA (por debaixo de 1 e 2,5 mg/kg). Ademais, os resultados están en consonancia cos límites establecidos pola CAC (2010) e a EU45,46, é dicir, o límite máximo permitido é de 1 mg kg-1 para as fórmulas infantís e de 2,5 mg kg-1 para os produtos lácteos.
Segundo un estudo de 2023 realizado por Ghanati et al.47, o contido de melamina en diferentes tipos de leite envasado en Irán oscilaba entre os 50,7 e os 790 μg kg−1. Os seus resultados estiveron por debaixo do límite permitido pola FDA. Os nosos resultados son inferiores aos de Shoder et al.48 e Rima et al.49. Shoder et al. (2010) descubriron que os niveis de melamina no leite en po (n=49) determinados por ELISA oscilaba entre os 0,5 e os 5,5 mg/kg. Rima et al. analizaron os residuos de melamina no leite en po mediante espectrofotometría de fluorescencia e descubriron que o contido de melamina no leite en po era de 0,72 a 5,76 mg/kg. En 2011 realizouse un estudo no Canadá para monitorizar os niveis de melamina nas fórmulas infantís (n=94) mediante cromatografía líquida (LC/MS). Descubriuse que as concentracións de melamina estaban por debaixo do límite aceptable (estándar preliminar: 0,5 mg kg−1). É improbable que os niveis fraudulentos de melamina detectados fosen unha táctica empregada para aumentar o contido de proteínas. Non obstante, isto non se pode explicar polo uso de fertilizantes, a recolocación do contido dos envases ou factores similares. Ademais, non se revelou a orixe da melamina no leite en po importado ao Canadá50.
Hassani et al. mediron o contido de melamina en leite en po e leite líquido no mercado iraniano en 2013 e atoparon resultados similares. Os resultados mostraron que, agás unha marca de leite en po e leite líquido, todas as demais mostras estaban contaminadas con melamina, con niveis que oscilaban entre 1,50 e 30,32 μg g−1 en leite en po e entre 0,11 e 1,48 μg ml−1 en leite. Cabe destacar que non se detectou ácido cianúrico en ningunha das mostras, o que reduce a posibilidade de intoxicación por melamina para os consumidores.51 Estudos previos avaliaron a concentración de melamina en produtos de chocolate que conteñen leite en po. Aproximadamente o 94 % das mostras importadas e o 77 % das mostras iranianas contiñan melamina. Os niveis de melamina nas mostras importadas oscilaban entre 0,032 e 2,692 mg/kg, mentres que os das mostras iranianas oscilaban entre 0,013 e 2,600 mg/kg. En xeral, detectouse melamina no 85 % das mostras, pero só unha marca específica presentaba niveis superiores ao límite permitido.44 Tittlemier et al. informaron de niveis de melamina no leite en po que oscilaban entre 0,00528 e 0,0122 mg/kg.
A táboa 3 resume os resultados da avaliación de riscos para os tres grupos de idade. O risco foi inferior a 1 en todos os grupos de idade. Polo tanto, non existe ningún risco para a saúde non canceríxeno derivado da melamina nas fórmulas infantís.
Os niveis máis baixos de contaminación nos produtos lácteos poden deberse a unha contaminación non intencionada durante a preparación, mentres que os niveis máis altos poden deberse a adicións intencionadas. Ademais, o risco xeral para a saúde humana derivado do consumo de produtos lácteos con niveis baixos de melamina considérase baixo. Pódese concluír que o consumo de produtos que conteñen niveis tan baixos de melamina non supón ningún risco para a saúde do consumidor52.
Tendo en conta a importancia da xestión da seguridade alimentaria na industria láctea, especialmente en termos de protección da saúde pública, é de suma importancia desenvolver e validar un método para avaliar e comparar os niveis e residuos de melamina no leite en po e nas fórmulas infantís. Desenvolveuse un método espectrofotométrico HPLC-UV sinxelo e preciso para a determinación da melamina nas fórmulas infantís e no leite en po. O método foi validado para garantir a súa fiabilidade e precisión. Demostrouse que os límites de detección e cuantificación do método son o suficientemente sensibles como para medir os niveis de melamina nas fórmulas infantís e no leite en po. Segundo os nosos datos, detectouse melamina na maioría das mostras iranianas. Todos os niveis de melamina detectados estaban por debaixo dos límites máximos permitidos establecidos pola CAC, o que indica que o consumo destes tipos de produtos lácteos non supón un risco para a saúde humana.
Todos os reactivos químicos empregados foron de grao analítico: melamina (2,4,6-triamino-1,3,5-triazina) 99 % pura (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); acetonitrilo de grao HPLC (Merck, Darmstadt, Alemaña); auga ultrapura (Millipore, Morfheim, Francia). Filtros de xiringa desbotables (Chromafil Xtra PVDF-45/25, tamaño de poro 0,45 μm, diámetro de membrana 25 mm) (Macherey-Nagel, Düren, Alemaña).
Para preparar as mostras empregáronse un baño de ultrasóns (Elma, Alemaña), unha centrífuga (Beckman Coulter, Krefeld, Alemaña) e unha HPLC (KNAUER, Alemaña).
Empregouse un cromatógrafo líquido de alta resolución (KNAUER, Alemaña) equipado cun detector UV. As condicións de análise por HPLC foron as seguintes: empregouse un sistema UHPLC Ultimate equipado cunha columna analítica ODS-3 C18 (4,6 mm × 250 mm, tamaño de partícula 5 μm) (MZ, Alemaña). O eluente de HPLC (fase móbil) foi unha mestura de TFA/metanol (450:50 mL) cun caudal de 1 mL min-1. A lonxitude de onda de detección foi de 242 nm. O volume de inxección foi de 100 μL e a temperatura da columna foi de 20 °C. Dado que o tempo de retención do fármaco é longo (15 minutos), a seguinte inxección debe realizarse despois de 25 minutos. A melamina identificouse comparando o tempo de retención e o pico do espectro UV dos estándares de melamina.
Preparouse unha solución estándar de melamina (10 μg/mL) con auga e almacenouse nun frigorífico (4 °C) lonxe da luz. Diluír a solución madre coa fase móbil e preparar solucións estándar de traballo. Cada solución estándar inxectouse na HPLC 7 veces. A ecuación de calibración 10 calculouse mediante análise de regresión da área do pico determinada e da concentración determinada.
Compráronse leite en po de vaca comercialmente dispoñible (20 mostras) e mostras de diferentes marcas de fórmula infantil a base de leite de vaca (20 mostras) en supermercados e farmacias locais de Irán para alimentar bebés de diferentes grupos de idade (0-6 meses, 6-12 meses e >12 meses) e almacenáronse a unha temperatura refrixerada (4 °C) ata a súa análise. Despois, pesouse 1 ± 0,01 g de leite en po homoxenizado e mesturouse con acetonitrilo:auga (50:50, v/v; 5 mL). A mestura axitouse durante 1 min, despois sonicouse nun baño de ultrasóns durante 30 min e finalmente axitouse durante 1 min. A continuación, a mestura centrifugouse a 9000 × g durante 10 min a temperatura ambiente e o sobrenadante filtrouse nun vial de mostraxe automática de 2 ml usando un filtro de xiringa de 0,45 μm. O filtrado (250 μl) mesturouse entón con auga (750 μl) e inxectouse no sistema HPLC10,42.
Para validar o método, determinamos a recuperación, a precisión, o límite de detección (LOD), o límite de cuantificación (LOQ) e a precisión en condicións óptimas. O LOD definiuse como o contido da mostra cunha altura de pico tres veces o nivel de ruído de referencia. Por outra banda, o contido da mostra cunha altura de pico 10 veces a relación sinal-ruído definiuse como o LOQ.
A resposta do dispositivo determinouse mediante unha curva de calibración que consta de sete puntos de datos. Empregáronse diferentes contidos de melamina (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 e 1,2). Determinouse a linealidade do procedemento de cálculo da melamina. Ademais, engadíronse varios niveis diferentes de melamina ás mostras en branco. A curva de calibración construíuse inxectando continuamente de 0,1 a 1,2 μg mL−1 dunha solución estándar de melamina en mostras de fórmula infantil e leite en po, e o seu R2 = 0,9925. A precisión avaliouse mediante a repetibilidade e a reproducibilidade do procedemento e conseguiuse inxectando mostras no primeiro día e nos tres días seguintes (por triplicado). A repetibilidade do método avaliouse calculando a porcentaxe de RSD para tres concentracións diferentes de melamina engadida. Realizáronse estudos de recuperación para determinar a precisión. O grao de recuperación mediante o método de extracción calculouse en tres niveis de concentración de melamina (0,1, 1,2, 2) en mostras de fórmula infantil e leite en po9,11,15.
A inxesta diaria estimada (IDE) determinouse empregando a seguinte fórmula: IDE = Ci × Cc/PC.
Onde Ci é o contido medio de melamina, Cc é o consumo de leite e BW é o peso medio dos nenos.
A análise dos datos realizouse co programa SPSS 24. A normalidade comprobouse coa proba de Kolmogorov-Smirnov; todos os datos foron probas non paramétricas (p = 0). Polo tanto, empregáronse as probas de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney para determinar as diferenzas significativas entre os grupos.
Ingelfinger, Jr. A melamina e o seu impacto na contaminación alimentaria global. New England Journal of Medicine 359(26), 2745–2748 (2008).
Lynch, RA e outros. Efecto do pH na migración da melamina nos pratos infantís. International Journal of Food Contamination, 2, 1–8 (2015).
Barrett, MP e Gilbert, IH. Dirixindo compostos tóxicos ao interior dos tripanosomas. Progress in Parasitology 63, 125–183 (2006).
Nirman, MF e outros. Avaliación in vitro e in vivo de dendrímeros de melamina como vehículos de administración de fármacos. International Journal of Pharmacy, 281(1–2), 129–132(2004).
Organización Mundial da Saúde. Reunións de expertos 1–4 para revisar os aspectos toxicolóxicos da melamina e do ácido cianúrico (2008).
Howe, AK-C., Kwan, TH e Lee, PK-T. Toxicidade da melamina e o ril. Journal of the American Society of Nephrology 20(2), 245–250 (2009).
Ozturk, S. e Demir, N. Desenvolvemento dun novo adsorbente IMAC para a identificación de melamina en produtos lácteos mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Journal of Food Synthesis and Analysis 100, 103931 (2021).
Chansuvarn, V., Panic, S. e Imim, A. Determinación espectrofotométrica simple de melamina en leite líquido baseada na reacción verde de Mannich. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Deabes, M. e El-Habib, R. Determinación de melamina en mostras de fórmula infantil, leite en po e pangasius mediante cromatografía de matriz de díodos/HPLC. Journal of Environmental Analytical Toxicology, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Skinner, KG, Thomas, JD e Osterloh, JD Toxicidade da melamina. Journal of Medical Toxicology, 6, 50–55 (2010).
Organización Mundial da Saúde (OMS), Toxicoloxía e aspectos sanitarios da melamina e do ácido cianúrico: Informe dunha reunión colaborativa de expertos OMS/FAO apoiada por Health Canada, Ottawa, Canadá, 1-4 de decembro de 2008 (2009).
Korma, SA, et al. Estudo comparativo da composición lipídica e a calidade do po de fórmula infantil que contén novos lípidos estruturais funcionais e a fórmula infantil comercial. European Food Research and Technology 246, 2569–2586 (2020).
El-Waseef, M. e Hashem, H. Mellora do valor nutricional, os atributos de calidade e a vida útil das fórmulas infantís mediante aceite de palma. Middle East Journal of Agricultural Research 6, 274–281 (2017).
Yin, W., et al. Produción de anticorpos monoclonais contra a melamina e desenvolvemento dun método ELISA competitivo indirecto para a detección de melamina en leite cru, leite en po e penso. Journal of Agricultural and Food Chemistry 58(14), 8152–8157 (2010).